顯微鏡觀察

無論是何種顯微鏡，其主要功能都在於將影像放大( magnification )，並增加影像的明暗對比( contrast )。

顯微鏡種類繁多，依其呈像原理大致可以分為光學顯微鏡和電子顯微鏡 ... 顯微鏡觀察 　 　 　         微生物—顧名思義，就是十分微小的生命體。

以人類肉眼是很難看見微生物的外觀，更何況是研究其外部型態以及內部構造。

因此在微生物學中，使用顯微鏡的觀察十分重要。

除了觀看微生物的外觀之外，許多的測試以及化學作用的呈色結果，都需要依靠顯微鏡的觀察。

　 　 　 　 公制單位與顯微鏡的使用 學習目標：於本次實驗結束後你應該知道 各公制單位之名稱、代表數值及各單位間的轉換 複式光學顯微鏡各部位的名稱及功能 解剖顯微鏡各部位的名稱及功能 比較複式光學顯微鏡及電子顯微鏡之間的差異 字母“e”經過複式光學顯微鏡轉換後之影像 如何計算視野直徑及各鏡頭下之放大倍率 如何計算鏡頭下各細胞及標本之實際大小 依序寫出使用複式光學顯微鏡觀察之步驟 光學顯微鏡鏡頭的保養方法 油鏡的使用方法及使用之後如何去除鏡頭及玻片上的油 　 概說 1.公制單位 -----採十進位法 各公制單位的名稱及代表意義如下表所示： Table2-1.MetricUnitValues& Conversion（長度單位） Unit Symbol Value (decimal) Value (fractional) Value (exponent) RelativeSize Kilometer km 1,000m 1,000m 103m largest Meter m 1.0m 1.0m 100m 　 Centimeter cm 0.01m 1/100m 10-2m 　 Millimeter mm 0.001m 1/1,000m 10-3m 　 Micrometer mm 0.000001m 1/1,000,000m 10-6m 　 Nanometer nm 0.000000001m 1/1,000,000,000m 10-9m smallest Table2-2.MetricUnitValues& Conversion（重量單位） Unit Symbol Value (decimal) Value (fractional) Value (exponent) RelativeSize Kilogram kg 1,000g 1,000g 103g largest Gram g 1.0g 1.0g 100g 　 Milligram mg 0.001g 1/1,000g 10-3g 　 Microgram mg 0.000001g 1/1,000,000g 10-6g 　 Nanogram ng 0.000000001g 1/1,000,000,000g 10-9g smallest Table2-3.MetricUnitValues& Conversion（體積單位） Unit Symbol Value (decimal) Value (fractional) Value (exponent) RelativeSize Liter L 1.0L 1.0L 100L largest Milliliter mL 0.001L 1/1,000L 10-3L 　 Microliter mL 0.000001L 1/1,000,000L 10-6L smallest 同學必須熟練各單位之間的轉換，例如： 3.5cm=3.5×10-2m =3.5×10-2×106mm =3.5×104mm 轉換單位之目的在於避免使用極大或極小之數字。

2.顯微鏡 (MICROSCOPE)    人的肉眼由於先天的限制，在25cm的明視距離下，只能分辨相距0.2mm以上的兩點（即解析力( resolvingpower)為0.2mm），對於更微小的物體，就必須借助於顯微鏡。

無論是何種顯微鏡，其主要功能都在於將影像放大 (magnification)，並增加影像的明暗對比(contrast)。

   顯微鏡種類繁多，依其呈像原理大致可以分為光學顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。

兩者差異如下表所示： Table2-4.AComparisonof LightandElectronMicroscopes 　 Light(Compound) Electron(Transmission) Lenses 玻璃 電磁鐵 Illumination 包含多種波長的可見光 單一波長的電子束 Resolvingpower 0.2mm 1nm=0.001mm Magnifies 2,000× 100,000× Costs 數千美元 數十萬美元 Specimen 活的或死的皆可 必須為死的    增加光學顯微鏡影像的明暗對比的方法很多，例如利用染色法處理樣本，或在顯微鏡上附加特殊裝置（例如位相差顯微鏡 、暗視野顯微鏡、干涉顯微鏡、偏光顯微鏡、X光顯微鏡、螢光顯微鏡 、紫外光顯微鏡等）。

   本學年同學將使用到的顯微鏡有雙目鏡複式光學顯微鏡 及雙目鏡解剖顯微鏡兩種，以下將分別介紹其各部位的名稱及功能。

(1)雙目鏡複式光學顯微鏡 接目鏡：放大倍率為10×，可因應各人的雙眼距離來調整，內安裝有目鏡測微尺，有些另裝有指針，裝有目鏡測微尺的接目鏡上有調節輪，可因應各人焦距來調整。

鏡筒：介於接目鏡與接物鏡之間。

旋轉盤 ：接於鏡筒下方，通常有四個接孔，可接不同倍數的接物鏡，本身可以旋轉藉以更換不同倍數的接物鏡。

接物鏡：有scanningpowerobjective( 3.2×)、lowpower objective(10×)、high powerobjective(40×)、oil immersionobjective(100×)四種。

載物台：為放置標本玻片的平台，中央有一圓孔，可供光線通過。

我們所使用的載物台為機械式載物台 ，上面有玻片夾及調節鈕(mechanicalstagecontrol knobs)，可固定玻片及調整玻片位置。

集光器(Condenser)：位於載物台下方中央，由許多透鏡組合而成，用以集合光線，使之投射於標本上。

光圈(虹膜)(Irisdiaphragm)：連接於集光器下方，上有一支調整柄 (aperturediaphragmcontrol)，可用以調整光圈孔徑大小，以調整投射於標本上之光線強弱。

照明器(Illuminator)：位於鏡座上，內設光源為鎢絲燈，直接提供觀察所需之光源。

鏡臂(Arm)：連接鏡筒及鏡座，並供握取顯微鏡。

調節輪(Adjustmentknob)：位於鏡柱兩側，可調整載物台的升降，以供對焦。

依順時鐘方向（遠離自己身體方向）旋轉，則載物台上升，反之則下降（＊注意：此方向有時依機型廠牌不同而異，也有調節輪是調節鏡筒之升降者，首次使用時可先緩慢旋轉試試看即可確定）。

鏡座(Base)：顯微鏡之最底部。

其右側有光源調整鈕，可調整照明器內光源亮度；後方接有電源線，有時尚有光源開關。

　 (2)雙目鏡解剖顯微鏡(Binocular dissectingmicroscope)(Stereomicroscope) 接目鏡(Eyepiece)：放大倍率為 8×(M1A機型)或10×( M3機型)，有些的接目鏡上有調節輪(M3機型)，可因應各人焦距來調整。

鏡筒(Bodytube)：介於接目鏡與接物鏡之間。

接物鏡(Objective)：M1A機型只有1×一種；M3機型則有6.4×、10×、40×三種，鏡筒兩側有切換鈕，可切換三種不同倍數的物鏡。

調節輪(focusingknob)：位於鏡柱兩側，可調整接物鏡的升降，以供對焦。

依順時鐘方向（遠離自己身體方向）旋轉，則接物鏡上升，反之則下降。

鏡柱(Pillar)：連接鏡筒及鏡座，並供握取顯微鏡。

照明器(Illuminator)：位於鏡座上，內設光源為鎢絲燈，直接提供觀察所需之光源（※注意：由於此光源為熱光源，使用時會發熱，應避免直接接觸照明器，以免燙傷），開關在電源線上。

鏡座(Base)：顯微鏡之最底部。

其上有載物台，為一圓盤，有黑白兩色，可依需要自行變換。

3.複式光學顯微鏡的使用方法 (1)顯微鏡的取用 一手握鏡臂，一手托住鏡座，將顯微鏡輕輕放置在桌上，距桌緣約一個姆指距離之處。

調整坐椅至適當高度，使自己可以輕鬆地使用顯微鏡。

取95%酒精及拭鏡紙，將所有鏡頭擦拭乾淨（※注意：僅能以單一直線方向擦拭）。

將玻片標本平穩地放在載物台上，以玻片夾夾好（※注意：請確認是否夾好，以免玻片跳起，造成同學受傷或損及顯微鏡鏡頭）。

(2)低倍鏡的使用 先將載物台降至最低點，轉動旋轉盤(Revolvingnosepiece)，使低倍鏡位於鏡筒正下方。

打開光源，調整光源調整鈕及光圈(Irisdiaphragm)，使視野中之亮度適當。

將所要觀察的玻片放在載物台上，以玻片夾夾好，並轉動調節鈕 (mechanicalstagecontrolknobs)以調整玻片位置。

轉動調節輪 (Adjustmentknob)，至低倍鏡與載物台相距約0.1cm（或載物台無法再上升）為止。

由接目鏡觀察，同時以靠向自己的方向緩緩轉動調節輪(Adjustmentknob)，使載物台下降，直到影像清晰為止。

若視野太亮或太暗，皆可調整光源調整鈕及光圈(Irisdiaphragm)，使視野中之亮度適當。

(3)高倍鏡的使用 先使用低倍鏡找到欲觀察的目標，將該部位調整至視野中央。

重覆“低倍鏡的使用”方法之A.~D.。

(4)油鏡的使用 先使用高倍鏡找到欲觀察的目標，將該部位調整至視野中央。

將高倍鏡轉開，加一小滴油鏡專用油(immersionoil)於所見物像範圍的玻片上（即光線照亮的區域），換用100倍接物鏡（即oilimmersion objective），小心將油鏡浸於油中，重新調整光圈，並緩慢轉動調節輪(Adjustmentknob)，直到影像清晰為止。

(5)注意事項 嚴忌單手提取顯微鏡。

若須移動顯微鏡，務必將顯微鏡提起再放至適當位置，嚴忌推動顯微鏡（推動時造成的震動可能會導致顯微鏡內部零件的鬆動，切記!!），使用顯微鏡請務必小心輕放。

使用顯微鏡時坐椅的高度應適當，觀察時更應習慣兩眼同時觀察，且光圈及光源亮度皆應適當，否則長時間觀察時極易感覺疲勞。

轉動旋轉盤時務必將載物台降至最低點，以免因操作不當而刮傷接目鏡之鏡頭。

標本染色或其他任何操作皆應將玻片取下，操作完成後再放回載物台觀察，切勿在載物台上操作，以免染劑或其他液體流入顯微鏡內部或傷及鏡頭。

觀察完一種材料，欲更換另一種材料時，務必將載物台下降至最低點，換好玻片後再依標準程序重新對焦，切勿直接抽換標本，以免刮傷鏡頭或玻片標本。

顯微鏡使用前後皆應以拭鏡紙( Lenspaper)及95%Alcohol清潔所有鏡頭，擦拭時應沿單一直線方向輕拭，不可旋轉磨擦。

擦拭顯微鏡鏡頭時只能用拭鏡紙(Lenspaper)，切勿用其他紙張或手指接觸鏡頭。

用畢顯微鏡應將載物台下降至最低點，並將低倍鏡對準載物台中央圓孔處，將電源線捲好，蓋上防塵罩，並收入存放櫃中。

若長期不使用，應以Xylene( Xylol)清潔所有鏡頭。

　 4.放大倍數 &顯微測量法    顯微鏡之放大倍數之近似值，趨近於接目鏡與接物鏡放大倍率之乘積，但由於製作時的差異，每一個鏡頭皆有些許不同的誤差。

欲得知所觀察物體的實際大小，首先在目鏡的兩鏡頭之間加裝一個目鏡測微尺 (Ocularmicrometer)（如圖2-1a所示）。

在載物台上置一載物台測微尺 (Stagemicrometer)（如圖2-1b所示），該測微尺為載玻片上刻有一段劃分1mm為100小格的直線，即載物台測微尺上每小格的長度為0.01mm(10mm)。

使用方法為：移動載物台測微尺，使兩測微尺之一端刻度重疊成一直線，再檢視另一端刻度重疊處，分別計算此一區間內，兩測微尺上之格數，則目鏡測微尺上每一格長度之計算如下： （a）（b） 圖2-1（a）兩種不同的目鏡測微尺（Ocular micrometer）（b）載物臺測微尺（Stagemicrometer） 　 5.解剖顯微鏡的使用方法    解剖顯微鏡又稱立體顯微鏡 (stereomicroscope)，其使用及維護方法與複式光學顯微鏡類似。